SYBR Green I(10000×)电泳用

SYBR Green I(10000×)电泳用

SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。

SYBR Green I适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。

SYBR Green I与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBR Green I与EB相比，诱变能力大大降低。

SYBR Green I核酸染料特点

高灵敏：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。

信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

操作简单：无须脱色或冲洗。

适用范围广：可适用于多种电泳分析。

使用方便：不影响其它修饰酶作用。

安全性高：分子克隆上明确诱变能力很低

使用方法

SYBR Green I预染方法

1.       该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳

2.       工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。

3.       制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。

4.       样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。

5.       DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。（商品Marker最好稀释2-5倍后再电泳，否则电泳条带会变形，特别是大片段。）

6.       上样、电泳：按常规操作。

SYBR Green I后染方法

1.       按照常规方法进行电泳。

2.       用PH=7.0-8.5的缓冲液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。

3.       将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

4.       用紫外仪观测。

SYBR Green I使用注意事项

1.       在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。

2.       在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。

3.       如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%- 0.3%的SDS。

4.       在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBR Green I呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。

5.       SYBR Green对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。